Laiko prekybos sistemos tewksbury ma,

IKEA Elektroninė Parduotuvė | Prisijunkite Ir Pirkite Dabar

Syntenin padidina smulkiųjų ląstelių plaučių vėžio ląstelių invaziškumą aktyvuodamas p38, AKT, židinio adhezijos kinazę ir SP1 Vasaris Anotacija Syntenin yra PDZ domeną turintis adapterio baltymas, kuris neseniai parodė, kad reguliuoja migraciją ir invaziją keliose navikose.

Smulkialąstelinis plaučių vėžys SCLC yra žinomas dėl savo invaziškumo ir stipraus metastazių potencialo. Todėl tyrėme sintenino įtaką SCLC invaziškumui. Imunohistochemija naviko audiniuose parodė, kad sinteninas dažniau buvo išreikštas mažų ląstelių karcinoma nei kiti neuroendokrininiai navikai, tokie kaip karcinoidai ir neuroblastomos, o tai rodo, kad sinteino ekspresija gali būti susijusi su agresyvesnėmis neuroendokrininių navikų formomis.

Be to, nepaisant to, kad nėra ECM sąveikos, pradinės molekulės židinio adhezijos kinazė buvo paskatinta sinteino aktyvavimu.

laiko prekybos sistemos tewksbury ma

Šie rezultatai rodo, kad sinteninas gali prisidėti prie SCLC invaziškumo ir gali būti naudojamas kaip naujas terapinis taikinys invazijai ir metastazėms kontroliuoti SCLC. Įvadas Pagrindinės piktybinių navikų ląstelių savybės yra jų gebėjimas įsiveržti į užsienio audinius ir formuoti metastazavusius židinius tolimose kūno vietose.

Tokiems procesams reikalingas naviko ląstelių prisijungimas prie įvairių matricų baltymų ir ekstraląstelinės matricos ECM skaidymas, daugiausia matricos metaloproteinazės MMP pagalba, po to auglio ląstelių migracija į aplinkinę stromą.

Syntenin, taip pat žinomas kaip melanomos diferenciacijos genas-9, yra adapterio baltymas, turintis PDZ domeną, kuris dalyvauja organizuojant baltymų laiko prekybos sistemos tewksbury ma plazmos membranose, reguliuojant B ląstelių vystymąsi, intracelinę prekybą ir ląstelių paviršiaus taikymą, sinaptinį transmisija ir aksoninis augimas.

Apoptozė, autofagija ir ER stresas mevalonato kaskados slopinimo žmogaus ląstelių mirties metu

Su invazija susijusį sinteino vaidmenį pirmą kartą stebėjo piktybinė melanoma. Panašūs rezultatai buvo nustatyti atliekant tyrimą, naudojant krūties ir šlapimo pūslės vėžio ląsteles; šis tyrimas atskleidė, kad su sinteninu susijusį poveikį gali reguliuoti ligandų prisijungimas prie PDZ domenų. Būdinga, kad sinteino signalizacija buvo diferencijuota, priklausomai nuo naudojamų ląstelių linijų ir ECM stimuliatorių.

Šiame tyrime pirmą kartą SCLC parodėme, kad sinteinas gali paskatinti SCLC invaziškumą ir metastazę per unikalius kelius, skirtingus nuo piktybinės melanomos ar kitų karcinomos ląstelių. Ląstelės buvo transfekuotos su sinteino ekspresijos vektoriumi arba tuščiu pCMV-Tag2 vektoriu, naudojant Lipofectamine Invitrogenšešių šulinėlių lėkštelėse 8 × ląstelių šulinėlyje ir kultivuotos serumo bado sąlygomis. Transfekuotos ląstelės buvo surinktos 12—24 val.

Po transfekcijos.

Ląstelių linijos buvo transfekuotos su sintenino siRNR arba sušukuotu siRNR, naudojant Lipofectamine Invitrogen šešių šulinių plokštelėse 8 × ląstelių šulinėlyje. Ląstelės buvo surinktos 48 val. Atvirkštinė transkripcija ir kiekybinė realaus laiko PCR Po 24—48 val.

Sinteino ekspresijos vektoriaus arba siRNR transfekcijos ląstelės buvo surenkamos ir visa RNR ekstrahuota naudojant Trizol Invitrogenforex turino kursai gamintojo instrukcijas.

PCR produktai buvo analizuojami naudojant standartinę agarozės gelio elektroforezę. Ląstelės du kartus plaunamos ledu šaltu PBS kalcio ir magnio be fosfato buferiniu tirpalu ir surenkamos centrifuguojant 15 x g 5 min. Supernatantu buvo citoplazminė frakcija. Nustačius visą ląstelių lizatų ir branduolinių arba citoplazminių ekstraktų baltymų koncentraciją Bradfordo reagentu Bio-Radvienodi baltymų mėginių kiekiai buvo atskirti elektroforezės natrio dodecilo sulfatu-poliakrilamido SDS-PAGE pagalba ir perkelti į polivinilideno difluorido membranas Millipore, Bedford, MA, JAV.

Imunoblotai buvo vizualizuoti naudojant sustiprintą chemiliuminescencijos aptikimo sistemą Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Švedija. MTT tyrimas Ląstelių gyvybingumas buvo stebimas 2- 4, 5-dimetil-tiazolil -2, 5-difenil-tetrazolio bromido MTT kolorimetriniu tyrimu Sigma.

Trumpai tariant, į kiekvieną šulinėlį buvo pridėta 20 μl MTT 5 mg Po 4 valandų inkubavimo 37 ° C temperatūroje ląstelių supernatantai nebuvo išmesti.

MTT kristalai buvo ištirpinti dimetil sulfoksidu ir absorbcija buvo matuojama esant nm. Visi eksperimentai buvo atlikti 96 šulinėlių plokštelėse ir pakartoti bent tris kartus.

Filtras buvo padengtas 10 μg Matrigel. Apatinis filtrų paviršius buvo padengtas lamininu kaip chemoattraktas.

laiko prekybos sistemos tewksbury ma

Tada ląstelės, perkeltos į apatinį paviršių, buvo fiksuotos metanoliu, nudažytos hematoksilinu ir skaičiuojamos penkiuose atsitiktinai atrinktuose mikroskopiniuose laukuose vienam filtrui × Pateiktas vidutinis skaičiuojamų ląstelių skaičius iš trijų nepriklausomų eksperimentų. Želatino zymografija Kondicionuojama terpė ir ląstelių lizatai buvo elektroforezuojami poliakrilamido gelyje, turinčiame 1 mg ml 1 želatinos.

Proteolizė buvo nustatyta kaip balta zona tamsiai mėlynos spalvos lauke, kaip aprašyta anksčiau J Biol Chem— Ląstelės 1 valandą buvo apdorotos vienu iš šių inhibitorių ir po to transfekuotos su sinteino ekspresijos vektoriumi arba tuščiu pCMV-Tag2 vektoriumi. Dimetilsulfoksidas buvo naudojamas kaip tirpiklis SB, LY ir PF ištirpinimui ir neigiamai kontrolei palyginimui. Elektroforetinis mobiliojo poslinkio tyrimas Branduoliniai ekstraktai buvo paruošti, kaip laiko prekybos sistemos tewksbury ma aukščiau, iš ląstelių, transfekuotų su sinteininiu vektoriu arba tuščiu vektoriumi.

laiko prekybos sistemos tewksbury ma

Elektroforetinis mobiliojo poslinkio tyrimas buvo atliktas kaip aprašyta anksčiau. Trumpai tariant, 5 μg branduolinių ekstraktų 30 min. Susiejimo specifiškumas patvirtintas konkuruojant su nepažymėtomis oligonukleotidais ir SP1 antikūnu Santa Cruz Biotechnology. Naviko audinių mėginiai Sintenino ekspresijos raida neuroendokrininiuose navikuose buvo tiriama naudojant naujai pagamintą audinio mikroelementų bloką.

Surinkome neuroendokrininių navikų, sudarytų iš 24 mažų ląstelių karcinomų, 20 karcinoidų ir 15 neuroblastomų.

5 pavojingai populiarūs atostogų žaislai

Mažų ląstelių karcinomos atvejai buvo gauti iš įvairių organų, tokių kaip plaučių, skrandžio, šlapimo pūslės, prostatos ir kepenų, audinių mėginiai. Neuroblastomos kilo iš kintamų vietų, įskaitant antinksčių, mediastino ir retroperitoneumo vietas. Visi atvejai buvo diagnozuoti Seulo nacionalinėje universitetinėje ligoninėje nuo iki m. Pagrindiniai audiniai 2 mm skersmuo buvo paimti iš 59 neuroendokrininių navikų donorų blokų formalino fiksuotų, parafinų įdėtų blokų ir išdėstyti nauju recipiento parafino bloku, naudojant trefino aparatai Superbiochips Laboratories, Seulas, Korėja.

Pilno dydžio lentelė Antra, 58 papildomi SCLC biopsijos mėginiai, diagnozuoti Seulo nacionalinėje universitetinėje ligoninėje — m. Trumpai tariant, ribotą ligą apibūdino augliai, apsiribojantys viena hemitorfacija, tuo tarpu visi kiti atvejai buvo klasifikuojami kaip plati liga.

Imunohistochemija Imunohistocheminis dažymas sinteinui buvo atliktas naudojant anti-syntenin pelių monokloninį antikūną Abnova. Po šilumos sukeltos antigenų atgavimo citrato buferyje pH 6, 0sekcijos buvo inkubuojamos 1: anti-syntenin antikūno praskiedimu 15 min.

Kambario temperatūroje. Statistinė analizė Tiriamųjų kintamųjų skirtumams ištirti buvo panaudotas arba Pearsono X2 testas, arba Fišeris. Teigiami atvejai sinteinas buvo stipriai ekspresuotas ląstelių membranoje ir citoplazmoje 1 pav. Įvairių organų smulkiųjų ląstelių karcinomų sinteinų ekspresija reikšmingai nesiskyrė.

Tačiau šis skirtumas nebuvo statistiškai reikšmingas. Syntenin ekspresija neuroendokrininiuose navikuose ir bazinės ekspresijos lygiai mažo ląstelių plaučių vėžio ląstelių linijose. Reprezentatyvūs smulkiųjų ląstelių karcinomos, neuroblastomos ir karcinoido pavyzdžiai pateikti atitinkamai b, c ir d. NCI-H ir H69 ląstelės buvo tiriamos toliau.

Viršijimas sintenino padidina ląstelių gyvybingumą, proliferacinę veiklą ir invaziškumą SCLC ląstelėse FLAG-pažymėtą sinteino ekspresijos vektorių arba tuščią vektorių mes perkėlėme į sintenino mažas NCI-H ląsteles. Western blotting parodė mažesnę juostą 33 kDaatitinkančią endogeninę sinteniną, ir viršutinę juostą 34 kDaatitinkančią eksogeniškai transfekuotą FLAG žymėtą sinteniną 2a pav. Sintetino priverstinės ekspresijos arba slopinimo poveikis mažųjų ląstelių plaučių vėžio ląstelėse ekspresijos lygiams, proliferacijos veiklai ir invaziškumui.

Šis juostos dydžio skirtumas buvo nustatytas dėl padidėjusio baltymų kiekio dėl FLAG žymos. Vidutiniškai įsišaknijusių ląstelių skaičius iš penkių atsitiktinai atrinktų laukų vienam filtrui buvo parodytas klaidų juostose apačioje.

MTT, 2- 4, 5-dimetiltiazolil -2, 5-difenil-tetrazolio bromidas. Pilno dydžio vaizdas Naudodamiesi šiomis ląstelių linijomis, pirmiausia analizavome sintenino poveikį ląstelių gyvybingumui ir proliferacijai MTT tyrimu. Toliau mes naudojome Matrigelio invazijos tyrimą, kad nustatytume sintenino poveikį SCLC ląstelių invaziškumui. Kaip parodyta 2e paveiksle, ląstelių, įsiveržusių į apatinį filtro paviršių, skaičius buvo apie 5—6 kartus didesnis sintefinu transfekuotose NCI-H ląstelėse, lyginant su tuščiomis vektoriniu transfekcijos ląstelėmis.

Šie rezultatai rodo, kad sinteino ekspresija gali turėti įtakos SCLC invazijai. Sintenino transfekuotų NCI-H ląstelių supernatante aktyvūs MMP2 baltymų kiekiai 63 kDa laiko prekybos sistemos tewksbury ma, lyginant su tuščiomis vektorinėmis transfekuotomis ląstelėmis, proporcingas viršutinio koncentracijos serijos koncentracijai 3a pav.

  • IKEA Elektroninė Parduotuvė | Prisijunkite Ir Pirkite Dabar
  • 5 pavojingai populiarūs atostogų žaislai - Viršutinė istorija
  • Kai siekiate užtikrinti savo verslo augimą, transformaciją ir pasiruošti ateičiai skaitmeniniu būdu Ar jūs pasiruošę?
  • Pasiruoškite skaitmeninei ateičiai | Columbus Lietuva

Syntenin transfekuotose ląstelėse ryškus membranos tipo 1-matricos metaloproteinazės MT1-MMP degraduotos formos padidėjimas buvo identifikuojamas Western blot, naudojant viso ląstelių lizatus 3a pav.

Sumažėjusios MT1-MMP formos sumažėjimas taip pat buvo pastebėtas vakarų blotoje, naudojant viso ląstelių lizatus 3b pav.

Poveikis su invaziškumu susijusioms molekulėms, atsirandančioms dėl sintenino pernelyg didelio išsiskyrimo sinteino žemoje NCI-H ląstelėse ir sintenino nusileidimo sinteino aukštoje NCI-H69 ląstelėse.

Ši juosta atitinka anksčiau žinomą MMP2 formą. Aktyvios formos juosta 63 kDa taip pat buvo stebima žemiau pro-formų juostos. Pilno dydžio vaizdas Kad būtų galima toliau nustatyti funkcinės MMP2 indukciją pernelyg didelio sinchroninio ekspresijos būdu, atlikome želatinos zimografiją. Kaip parodyta 3c paveiksle, padidėjusios juostos, kurių dydis buvo 72 kDa ir 63 kDa, buvo stebėtos sintenino viršekspressuojamose NCI-H ląstelėse.

Šios juostos atitinka atitinkamai MMP2 formą ir aktyviąją formą. Šie duomenys rodo, kad MMP2 yra indukuotas ir taip pat suaktyvintas sinteninu, kuris gali būti sinteino vaidmuo skatinant SCLC ląstelių invaziškumą. Šie keliai buvo atrinkti remiantis ankstesniais sintenino tyrimais.

P38, AKT ir židinio adhezijos kinazės aktyvinimas, laiko prekybos sistemos tewksbury ma ekspresuojant sinteniną smulkių ląstelių plaučių vėžio ląstelėse.

Židinio adhezijos kinazės FAK aktyvacija sinteino pernelyg didėjančia ekspresija ir FAK slopinimas sinteino slopinimu taip pat buvo pastebėta be jokių ekstraląstelinių matricų baltymų stimuliavimo.

NCI-H69 ląstelių invaziškumą slopino sinteino slopinimas. Pilno dydžio vaizdas Ankstesniuose tyrimuose 9, 13 sinteino ekspresija taip pat sukėlė FAK aktyvaciją, kuri turi įtakos integrino sukeltų signalizacijos takų aktyvacijai, sąveikaujant su ECM proteinais, tokiais kaip fibronektinas ir kolagenas.

laiko prekybos sistemos tewksbury ma

Optimali SB koncentracija 10 μM buvo nustatyta santykinai lyginant fosforilintus-p38 p-p38 lygius tarp tuščios vektoriaus transfekuotos ir sinteino vektoriaus transfekuotos būklės. Tokioje koncentracijoje p-p38 koncentracija buvo šiek tiek sumažinta, nepaisant sinteino transfekcijos sinteino transfekuotose ląstelėse, nors bazinis p-p38 lygis buvo padidintas tuščių vektorinių transfekuotų ląstelių atžvilgiu, nes SB yra ne tik inhibitorius bet ir kaip dalinis agonistas.

Priešingai, p-p38 buvo padidėjusi sintetino-pernelyg išreikštose ląstelėse, kontroliuojamose dimetil sulfoksidu.

laiko prekybos sistemos tewksbury ma

Be to, NCI-H69 ląstelių invaziškumas buvo labiau slopinamas sinteino slopinimu. Syntenin veikia, aktyvuodamas SP1 transkripcijos faktorių SCLC, tačiau turi mažai įtakos NF-κB aktyvumui Ankstesnės ataskaitos, kuriose buvo naudojamos piktybinės melanomos ląstelės, parodė, kad NF-κB aktyvumas buvo padidintas priverstine sintenino ekspresija.

IkBα koncentracijos, analizuojamos 12 val. Ir 24 val. Po sinteino transfekcijos, nepasikeitė 5a pav. Be to, mes matavome ir lyginome NF-κB p65 subvieneto lygius tarp citozolinių ir branduolinių ekstraktų sinteininiuose arba tuščiuose vektoriniu transfekuotuose NCI-H ląstelėse.

Kaip parodyta 5b paveiksle, citoplazminiai p65 kiekiai sinteino ekspresija nesikeitė, o p65 branduolio perkėlimas nepastebėtas. SP1 aktyvinimas ir NF-κB inaktyvacija sinteninu mažų ląstelių plaučių vėžio ląstelėse.

Nuo laiko priklausomas degradavimas nebuvo pastebėtas. Įrašius nepažymėtą SP1 specifinį oligonukleotidą šaltojo konkurentosumažėjo rišimasis. Inkubavimas su SP1 antikūnu atskleidė super-perkeliamą juostą dėl padidėjusios DNR-baltymų komplekso molekulinės masės, susidariusios prisijungus prie antikūnų.

Tai atskleidė, kad SP1 įsikišo į sinteino sukeltą signalizaciją. Pilno dydžio vaizdas Kadangi NF-κB aktyvumas nebuvo paveiktas sinteino aktyvavimu, mes ieškojome kitų molekulių, kurios perduoda signalus į branduolį. DNR-baltymų komplekso surišimo specifiškumą parodė SP1 surišimo sumažėjimas, sąveika su nežymiu šaltuoju konkurentu. Inkubavimas su SP1 antikūnu parodė super perkeliamą juostą, dar kartą patvirtindamas specifinį SP1 ir konsensuso oligomerų prisijungimą 5c pav.

Šie rezultatai rodo, kad SP1 aktyvuojamas sinteinu ir gali veikti kaip svarbus transkripcijos faktorius, susijęs su sinteinu susijusiu signalizavimu, siekiant skatinti invaziškumą SCLC ląstelėse. Sintetino ekspresijos atvejai diagnozės metu buvo plačiau ir pažengę.

Šie rezultatai rodo, kad gali būti SCLC pogrupis, kuriam būdinga sinteino ekspresija ir jos susiejimas su pažangesne naviko invazija. Be to, sintenino ekspresijos greitis mažose ląstelių karcinomose įvairiose vietose, įskaitant plaučius, buvo daug didesnis nei kitų neuroendokrininių navikų, tokių kaip karcinoidai ir neuroblastomos, o tai rodo, kad sintenino ekspresija gali būti susijusi su agresyvesnėmis neuroendokrininių navikų formomis. Kai pagal sintenino ekspresijos lygius SCLC ląstelių linijos buvo suskirstytos į dvi kategorijas dideles ir mažas sintenino ląstelessintenino mažai ląstelių sintezė padidino SCLC ląstelių gyvybingumą, proliferaciją ir invaziškumą ir sukėlė abiejų MT1-MMP ekspresiją.

Priešingai, nenustatėme jokio sintenino poveikio NF-κB aktyvumui SCLC ląstelėse, nors ankstesniuose tyrimuose buvo pabrėžtas NF-κB vaidmuo sinteninu susijusiuose signalizacijos keliuose.

Dar vienas unikalus mūsų tyrimo rezultatas yra tas, kad sintetino signalo transdukcija SCLC ląstelėse buvo pradėta nesant ECM sąveikos per integrino molekules, kurios pastebimos kituose navikuose. Po sinteino ekspresuojančio viruso transfekcijos melanomos ląstelės buvo surinktos ir perkeltos į fibronektino padengtus indus, po to atpažįstami įvairūs signalizavimo molekulių pokyčiai ir MMP indukcija.

Reikia tiksliai paaiškinti, kodėl šie skirtumai tarp anksčiau tiriamų adherentinių ląstelių linijų ir SCLC ląstelių su plaukiojančiu augimu yra aiškūs. Šis reiškinys gali atspindėti kai kuriuos biologinius skirtumus tarp adhezinių ląstelių ir suspensijos ląstelių.

Vienas spekuliacinis paaiškinimas galėtų būti ECM-neprisijungęs integrinų laiko prekybos sistemos tewksbury ma naudojant automatinį FAK aktyvavimą, kuris kolokalizuojasi su sinteinu ląstelių membranoje ir perduoda signalą iš integrino į sinteniną.

laiko prekybos sistemos tewksbury ma

ECM sąveikos įtaka buvo analizuojama keliuose tyrimuose įvairiais aspektais, įskaitant funkcinius ir morfologinius pokyčius. SCLC ląstelių prilipimas prie ECM baltymų padidina naviko genetiškumą ir suteikia atsparumą chemoterapiniams agentams, dėl β1-integrino stimuliuojamo signalizacijos kelio, slopinančio chemoterapijos sukeltą apoptozę.

Atsižvelgiant į tai, mūsų in vitro tyrime sintezės ekspresijos be ECM stimuliacijos rezultatai rodo, kad sinteninas gali turėti reikšmingesnį vaidmenį invaziškumo in vivo požiūriu, kur taip pat vyksta sudėtingesnės sąveikos su ECM.

Taip pat perskaitykite